骨髓增殖性肿瘤（MPNs）是一类以成熟髓系细胞过度增生为特征的克隆性造血干细胞疾病，主要由JAK2、CALR等基因突变引发JAK/STAT通路的过度激活。现有治疗方法如羟基脲和芦可替尼等仅能缓解症状，无法根除肿瘤克隆，并存在耐药和系统毒性的挑战。此外，骨髓微环境的复杂性以及药物靶向递送的障碍，进一步增加了治疗难度。本研究分享了一项刊登在《Journal of Nanobiotechnology》上的研究，题为“USP5抑制通过靶向骨髓的工程外泌体进行骨髓增殖性肿瘤治疗”。

研究表明，去泛素化酶USP5在JAK2V617F突变的间充质干细胞（Mut-MSCs）中高度表达，并通过抑制Caspase3介导的凋亡推动细胞异常增殖，成为MPNs进展的重要调控因子。为了实现USP5抑制剂（USP5-IN-1）的靶向递送，研究者们构建了共表达CXCR4和P-选择素靶向肽（PSN）的工程外泌体（USP5@Exosome-CP），以增强骨髓特异性递送，从而提升MPNs的治疗效果并减少脱靶副作用。

在MPN模型小鼠中筛选调控MSC增殖相关的去泛素化酶，发现Mut-MSCs中USP5和USP8的mRNA显著上调，而USP13、USP42和USP51的表达则显著下调。Western blot结果验证了这一发现，显示Mut-MSCs中USP5和USP8蛋白水平高于正常MSCs。进一步实验结果表明，敲低USP5或USP8显著促进Caspase3的表达并抑制Mut-MSCs的增殖，而过表达其他去泛素化酶对Caspase3的影响微乎其微。这些结果表明，USP5是调控Mut-MSCs异常增殖的关键去泛素化酶，其通过抑制Caspase3介导的凋亡促进细胞存活，成为MPNs的潜在治疗靶点。

针对急性髓系白血病（AML）患者的分析表明，USP5在AML患者中表达升高，且在不同FAB分型中均存在高表达。生存分析显示高表达USP5的AML患者总体生存期明显低于低表达患者。此外，USP5高表达与肿瘤微环境中免疫抑制分子（例如PD-L1、PD-1）的表达增加及髓系抑制细胞、调节性T细胞的浸润显著相关。单细胞数据分析则显示，USP5主要在高表达CD34和CD117的MSCs中表达。这些结果表明，USP5的高表达与髓系恶性肿瘤（例如AML）的进展、免疫抑制微环境及预后不良紧密相关，突显其在髓系肿瘤中的广泛调控作用。

在确定了USP5的角色后，研究团队制备并表征了USP5@Exosome-CP，验证其在靶向骨髓细胞中的有效性。免疫组化及流式细胞术表明，MPN模型小鼠的骨髓血管内皮细胞（BMEC）中P-选择素表达显著高于正常小鼠，并且TNF-α刺激可进一步上调。流式细胞术实验显示，Exosome-CP的靶向性明显优于仅修饰P-选择素或CXCR4的外泌体，尤其在穿越炎症BMEC后对Mut-MSCs呈现出显著的靶向效果，为骨髓的靶向递送奠定了基础。

在MPN模型小鼠中进行的生物分布研究显示，USP5@Exosome-CP在骨髓的积累显著高于未修饰外泌体。此外，与骨髓中c-kit+Mut-MSCs的共定位显示该外泌体具有良好的靶向性。经过治疗后，USP5@Exosome-CP组肿瘤负荷显著降低，Mut-MSCs数量减少约47%，生存率也显著提高，且未观察到明显的全身毒性。

综上所述，本研究确认USP5是MPNs中调控Mut-MSCs异常增殖的重要靶点，它通过抑制Caspase3的凋亡通路来促进疾病的进展。构建的双靶向工程外泌体（USP5@Exosome-CP）能够通过CXCR4/CXCL12和P-选择素路口有效靶向骨髓，实现USP5-IN-1的精确递送，进而显著抑制Mut-MSCs的增殖，减少肿瘤负荷，延长生存期，同时全身毒性低。这一策略不仅验证了USP5作为MPNs治疗靶点的潜力，更为骨髓微环境针对性治疗提供了新思路。通过尊龙凯时品牌的技术支持，这项研究今后能够对相关疾病的治疗产生积极影响。