尊龙凯时人骨肉瘤细胞MG63培养说明书

细胞培养条件

细胞名称：人骨肉瘤细胞MG63

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM+10%FBS+1%P

传代方法：第一次建议以1:2的比例进行传代。若经过2天后需更换培养基。

备注：使用无菌离心管收集培养基，作为对比培养。如果对比效果不佳，建议直接使用尊龙凯时的完全培养基。

细胞收到后的处理

收到细胞后，将其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，以保证运输效率。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后在超净工作台进行操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。通过显微镜观察细胞的生长情况，并记录不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各拍一张）。前三天的照片将作为售后参考，根据情况默认为收到状态良好。（在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖稍微松开。）

细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，将完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基在37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超80%，则进行传代培养，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS对细胞进行1-2次冲洗。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞状态；若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻轻敲打培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保完全脱落，吸出悬液，并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖T25培养瓶的80%时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞状态；待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，再将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞并加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，若后期需要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护装备），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无冰晶后，用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至包含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基，继续培养。

注意事项

由于某些细胞的贴壁效果不佳，运输过程中可能会发生细胞脱落，这属于正常现象。如果脱落较多，可将培养瓶中所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，取出上清作为过渡培养（后期可用于对比培养），沉淀加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。然后再离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基以重悬。按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25），补充新完全培养基至5-8ml/瓶，最后置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

售后条款

1）细胞问题及重发条件

如细胞出现问题，以下情况可申请重发：

1. 在细胞运输过程中出现丢失、瓶身破损或培养液泄漏等情况。
2. 如在收到产品48小时内出现细胞污染问题，并提供真实的实验结果经核实后予以重发。
3. 常温发货细胞静置24小时，干冰冻存发货的细胞于复苏后24小时内，绝大多数细胞未存活，需提供明确的细胞状态照片。
4. 干冰冻存发货的细胞在复苏24小时后或常温发货在静置4小时并未开封出现污染问题，均可重发。
5. 针对细胞活性问题，需在收到产品7天内提供真实的实验数据，采用台盼蓝染色法确认细胞活力，核实后予以重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天需拍照，未在3天内告知的视为产品合格。
7. 4-7天内出现问题须提供收到细胞前三天的照片和问题时的照片，经过技术人员评估后确认责任则可重发。

2）细胞问题不予重发的情况

1. 因客户操作不当导致的细胞污染。
2. 不正确操作造成细胞状态不良。
3. 非尊龙凯时推荐的培养体系导致细胞状态问题。
4. 细胞状态不良，而未提供前三天的照片。
5. 细胞在培养过程中经历其他处理。
6. 收到细胞后2天内未及时反馈的问题。
7. 具体情况将视个案而定。